सेल्युलर वेसिकल्स (ईवी) का अध्ययन करने वाले शोधकर्ताओं को अक्सर मानकीकरण, पुनरुत्पादकता और संवेदनशीलता से संबंधित चुनौतियों का सामना करना पड़ता है।अंतरकोशिकीय संचार के जटिल क्षेत्र में सफलता की खोज करने के लिए विश्वसनीय उपकरण और उच्च गुणवत्ता वाले अभिकर्मक आवश्यक हैं.
प्लेटलेट्स, हालांकि रक्त में छोटे सेलुलर टुकड़े, समृद्ध जैव सक्रिय सामग्री होते हैं और एक्सोसोम पीढ़ी और कार्यात्मक विनियमन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।मानव प्लेटलेट-व्युत्पन्न एक्सोसोम को उन्नत स्पर्श प्रवाह निस्पंदन (टीएफएफ) और आकार-बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी (एसईसी) तकनीकों का उपयोग करके अलग किया जाता है और शुद्ध किया जाता हैये एक्सोसोम अंतर्निहित जैविक गुणों को बनाए रखते हैं, जो उन्हें ईवी कार्यों का अध्ययन करने, सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करने और विश्लेषणात्मक तरीकों को कैलिब्रेट करने के लिए आदर्श बनाते हैं।
एक्सोसोम गतिविधि और स्थिरता को अधिकतम करने के लिए, एक उन्नत lyophilization प्रक्रिया प्रभावी रूप से नमी को हटा देती है,कठोर शीत श्रृंखला भंडारण की आवश्यकता के बिना 24 महीने तक शेल्फ जीवन का विस्तार (4 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण की सिफारिश)यह दीर्घकालिक स्थिरता उच्च गुणवत्ता वाली अनुसंधान सामग्री तक लगातार पहुंच सुनिश्चित करते हुए प्रयोगात्मक योजना और सूची प्रबंधन को सरल बनाती है।
ये थैलीकृत एक्सोसोम कई ईवी विश्लेषण तकनीकों में विश्वसनीय सकारात्मक नियंत्रण के रूप में कार्य करते हैं।नीचे अनुशंसित उपयोग दिशानिर्देश दिए गए हैं (विशिष्ट प्रयोगात्मक परिस्थितियों के आधार पर समायोजन की आवश्यकता हो सकती है):
| अनुप्रयोग तकनीक | अनुशंसित मात्रा |
|---|---|
| फ्लोरोसेंट नैनोकण ट्रैकिंग विश्लेषण (F-NTA) | 1μg |
| प्रवाह साइटोमेट्री | 5μg |
| एलिसा | १०-२० माइक्रोग्राम/कूप |
| वेस्टर्न ब्लोट | 10-20μg/लेन |
अल्ट्रासेंट्रिफ्यूगेशन और टीएफएफ-अलगाव वाले ईवी को एफ-एनटीए ईवी टेट्रास्पैनिन डिटेक्शन किट का उपयोग करके रंग दिया गया और जेटाव्यू® एक्स 30 के साथ विश्लेषण किया गया, जिससे सटीक नैनोस्केल विशेषता का प्रदर्शन हुआ।एफ-एनटीए सीडी 9 का उपयोग करके अतिरिक्त सत्यापन, CD63, और CD81 डिटेक्शन रिएजेंट्स ने प्लेटलेट-व्युत्पन्न EV में विशिष्ट मार्कर अभिव्यक्ति पैटर्न की पुष्टि की।